A prepara\u00e7\u00e3o pode ser feita sobre l\u00e2minas novas, descart\u00e1veis, ou mesmo com l\u00e2minas reutilizadas, neste caso devendo elas serem tratadas com mistura de \u00e1cido cr\u00f4mico e \u00e1cido sulf\u00farico e enxaguadas em \u00e1gua destilada.<\/p>\n
Naturalmente, o conhecimento t\u00e9cnico necess\u00e1rio para fazer um bom esfrega\u00e7o de sangue e medula \u00f3ssea n\u00e3o pode ser aprendido em um livro, devendo ser adquirida pela experi\u00eancia pr\u00e1tica. Por outro lado, a avalia\u00e7\u00e3o fi\u00e1vel das prepara\u00e7\u00f5es celulares depende da espessura da extens\u00e3o, da qualidade dos esfrega\u00e7os e da sua adequada colora\u00e7\u00e3o. Por esta raz\u00e3o, alguma instru\u00e7\u00e3o sobre a prepara\u00e7\u00e3o de esfrega\u00e7o ser\u00e1 dada para evitar a produ\u00e7\u00e3o de l\u00e2minas pobres.<\/p>\n
Uma boa prepara\u00e7\u00e3o de esfrega\u00e7os requer o uso de l\u00e2minas rigorosamente limpas, caso contr\u00e1rio, ser\u00e3o frequentes os esfrega\u00e7os com colora\u00e7\u00e3o irregular ou insatisfat\u00f3ria. As l\u00e2minas de vidro dever\u00e3o ser tratadas com uma mistura de \u00e1cido sulf\u00farico cr\u00f4mico, seguida por enxaguamento completo com \u00e1gua destilada, para se obter a limpeza necess\u00e1ria antes da utiliza\u00e7\u00e3o. Tamb\u00e9m existem l\u00e2minas preparadas comercialmente. Algumas com uma se\u00e7\u00e3o apropriada para marca\u00e7\u00e3o, e que n\u00e3o requerem qualquer pr\u00e9-tratamento especial. Todas elas devem ser mantidas livres de poeira, em estoque suficientemente grande deve estar sempre \u00e0 m\u00e3o.<\/p>\n
A prepara\u00e7\u00e3o de esfrega\u00e7os de sangue pode ser feito com a borda de uma lam\u00ednula ou com o lado menor de uma lam\u00ednula de borda suave, cuidando para garantir que n\u00e3o mais do que dois ter\u00e7os a tr\u00eas quartos do slide seja preenchido pelo esfrega\u00e7o. A t\u00e9cnica de extens\u00e3o deve ser tal que no filme final alguns dos eritr\u00f3citos estejam separados lado a lado e alguns agregados em pequenas manchas que n\u00e3o sejam muito grossas e resultem em superposi\u00e7\u00e3o e as c\u00e9lulas individuais n\u00e3o estejam suficientemente espalhadas impossibilitando a an\u00e1lise microsc\u00f3pica da estrutura fina celular.<\/p>\n
A aquisi\u00e7\u00e3o de uma boa t\u00e9cnica de extens\u00e3o, portanto, \u00e9 essencial e s\u00f3 \u00e9 poss\u00edvel por meio de muita pr\u00e1tica. Esfrega\u00e7os de medula \u00f3ssea podem ser preparados da mesma forma que esfrega\u00e7os de sangue. A medula aspirada, com ou sem anticoagulante, \u00e9 coletada em uma grande placa de Petri e o excedente de sangue da medula \u00e9 drenado, inclinando o tubo. V\u00e1rias pequenas por\u00e7\u00f5es de part\u00edculas contendo o aspirado da medula s\u00e3o coletadas do fundo da placa de Petri com a transfer\u00eancia do esfrega\u00e7o.<\/p>\n
O esfrega\u00e7o preparado desta maneira deve conter numerosas pequenas part\u00edculas de medula. Tr\u00eas ou quatro l\u00e2minas adicionais devem ser preparadas espremendo part\u00edculas de medula isoladas, que foram separadas da medula aspirada com a borda de uma l\u00e2mina ou com uma pequena vareta de madeira. Se apenas algumas part\u00edculas de medula estiverem dispon\u00edveis, o esfrega\u00e7o de part\u00edculas espremidas deve ser usado exclusivamente. Deve-se ter cuidado ao espremer as part\u00edculas da medula para preservar as c\u00e9lulas. Isso pode ser feito sobrepondo uma segunda l\u00e2mina sobre o primeira e deslizando sob uma press\u00e3o suave, espalhando assim o material particulado em uma camada fina.<\/p>\n
Exame microsc\u00f3pico confi\u00e1vel requer que esfrega\u00e7os de aspirados de medula \u00f3ssea contenham \u00e1reas finas de elementos celulares uniformemente distribu\u00eddos, intactos e compactos. Geralmente, esfrega\u00e7os de medula espessa n\u00e3o s\u00e3o adequados para o diagn\u00f3stico morfol\u00f3gico.<\/p>\n
A colora\u00e7\u00e3o dos esfrega\u00e7os de sangue e medula \u00f3ssea devem ser individuais e adaptadas a certos procedimentos de colora\u00e7\u00e3o padr\u00e3o. O procedimento de colora\u00e7\u00e3o mais utilizado (Wright \/ Pappenheim) come\u00e7a com a aplica\u00e7\u00e3o do corante de May-Gr\u00fcnwald por um curto per\u00edodo (4 a 6 minutos), resultando na fixa\u00e7\u00e3o simult\u00e2nea de \u00e1lcool na amostra. Os esp\u00e9cimes devem ser enxaguados com \u00e1gua destilada. As condi\u00e7\u00f5es de colora\u00e7\u00e3o subseq\u00fcentes (concentra\u00e7\u00e3o de colora\u00e7\u00e3o e tempo de colora\u00e7\u00e3o) com solu\u00e7\u00e3o dilu\u00edda de Giemsa devem ser adaptadas \u00e0s exig\u00eancias t\u00e9cnicas.<\/p>\n
O fator cr\u00edtico na colora\u00e7\u00e3o \u00e9 o pH da \u00e1gua destilada, que deve ser o mais pr\u00f3ximo poss\u00edvel do pH 7,0. Este requisito pode ser dif\u00edcil de conseguir na pr\u00e1tica, mas pode n\u00e3o ser prejudicial aos processos de colora\u00e7\u00e3o, desde que grandes varia\u00e7\u00f5es no pH sejam evitadas.<\/p>\n
Um tempo de colora\u00e7\u00e3o mais longo \u00e9 usado com um pH mais \u00e1cido, e tempos mais curtos s\u00e3o usados se a \u00e1gua \u00e9 b\u00e1sica. Se n\u00e3o for poss\u00edvel obter uma colora\u00e7\u00e3o universal satisfat\u00f3ria, recomenda-se tamponar a solu\u00e7\u00e3o de Giemsa da seguinte forma: 1 parte de solu\u00e7\u00e3o de reserva de Giemsa adicionada a 20 partes de solu\u00e7\u00e3o tamp\u00e3o de fosfato 0,0667 mol \/ L, pH 7,0 a 7,2. Alternativamente, pode-se utilizar a subst\u00e2ncia comercial de Wright (recomenda-se uma das seguintes solu\u00e7\u00f5es de \u00e1lcool met\u00edlico: eosina e uma mistura complexa de tiazinas), com uma solu\u00e7\u00e3o tamp\u00e3o de pH 6,4. O tempo de colora\u00e7\u00e3o com esta mistura de tamp\u00e3o-corante \u00e9 de aproximadamente 15 a 20 minutos. Finalmente, deve ser dada especial aten\u00e7\u00e3o \u00e0 limpeza regular do material de vidro utilizado na prepara\u00e7\u00e3o da solu\u00e7\u00e3o Giemsa e \u00e0 filtra\u00e7\u00e3o ocasional das solu\u00e7\u00f5es de colora\u00e7\u00e3o.<\/p>\n
Para obter uma indica\u00e7\u00e3o preliminar da quantidade e qualidade das c\u00e9lulas, a rotina de exame da amostra de esfrega\u00e7o \u00e9 realizada inicialmente por meio da varredura microsc\u00f3pica da l\u00e2mina sob lentes secas de baixa e alta pot\u00eancia. Para este exame, o uso de uma capa fina para reduzir a dispers\u00e3o de luz da superf\u00edcie do esfrega\u00e7o. Muitos exames citol\u00f3gicos podem ser feitos usando a lente seca de alta pot\u00eancia, mas para a avalia\u00e7\u00e3o da morfologia dos eritr\u00f3citos, uma lente de imers\u00e3o em \u00f3leo deve ser usada. A diferencia\u00e7\u00e3o final das c\u00e9lulas no esfrega\u00e7o de sangue deve ser realizada com uma lente de imers\u00e3o em \u00f3leo. O exame microsc\u00f3pico deve ser feito na borda da pena (o ter\u00e7o final) do esfrega\u00e7o: os rejeitos. no entanto, deve ser desconsiderado porque os elementos de c\u00e9lulas brancas parcialmente danificados que podem levar a falsas contagens de ell s\u00e3o artificialmente concentrados nesta regi\u00e3o. Por outro lado, c\u00e9lulas patol\u00f3gicas espec\u00edficas podem ser encontradas nesta regi\u00e3o da l\u00e2mina, bem como nas bordas do esfrega\u00e7o. Para avaliar com precis\u00e3o a morfologia eritrocit\u00e1ria, deve-se lembrar que a forma dos gl\u00f3bulos vermelhos pode ser alterada em por\u00e7\u00f5es excessivamente finas ou espessas do esfrega\u00e7o.<\/p>\n
Os aspirados de medula devem tamb\u00e9m primeiro ser examinados usando objetivas secas para obter uma vis\u00e3o geral da composi\u00e7\u00e3o celular e para evitar a perda de \u00e1reas localizadas de c\u00e9lulas espec\u00edficas, tais como grupos de c\u00e9lulas tumorais ou c\u00e9lulas de les\u00f5es granulomatosas. Quaisquer achados incomuns devem ser examinados cuidadosamente sob imers\u00e3o em \u00f3leo. Um exame microsc\u00f3pico combinado do l\u00edquido medular, como descrito, tem quase o mesmo significado que uma contagem de pelo menos 1000 c\u00e9lulas. Uma combina\u00e7\u00e3o de diferencia\u00e7\u00e3o qualitativa e quantitativa de esfrega\u00e7os de medula \u00f3ssea geralmente n\u00e3o \u00e9 necess\u00e1ria, exceto para fins espec\u00edficos de diagn\u00f3stico, por exemplo, estabelecimento de fra\u00e7\u00e3o de blastos.<\/p>\n
Todos os profissionais envolvidos em hematologia devem ter uma grande cole\u00e7\u00e3o de l\u00e2minas. Elas devem ser armazenadas em um estojo e devem ser cuidadosamente limpas com algod\u00e3o macio ou tiras de musselina saturadas com xilol ou com limpador de lentes dispon\u00edveis comercialmente para remover o \u00f3leo de imers\u00e3o ap\u00f3s cada exame. Este procedimento evita o desbotamento da mancha atrav\u00e9s da a\u00e7\u00e3o do \u00f3leo de imers\u00e3o,<\/p>\n
Regra Geral para o Diagn\u00f3stico de Hematologia Microsc\u00f3pica. Apenas um exame de uma combina\u00e7\u00e3o de esfrega\u00e7os de sangue e medula \u00f3ssea possibilita um diagn\u00f3stico completo<\/p>\n
Nas prepara\u00e7\u00f5es de esfrega\u00e7o de leuc\u00f3citos (concentrado de leuc\u00f3citos) o sangue venoso coletado em um tubo Vacutainer EDTA (l\u00edquido ou p\u00f3 \u00e9 recomendado. Os tubos vacutainer de citrato de s\u00f3dio tamb\u00e9m s\u00e3o aceit\u00e1veis).<\/p>\n
Os tubos devem estar devidamente preenchidos com sangue e podem ainda dar esfrega\u00e7os aceit\u00e1veis at\u00e9 3 horas ap\u00f3s a coleta. O conte\u00fado do tubo deve ser cuidadosamente misturado e centrifugado por 15 minutos a 1500 rpm. Ap\u00f3s centrifuga\u00e7\u00e3o e remo\u00e7\u00e3o do plasma (com uma pipeta) 0,3 a 0,5 ml da camada leucoplaquet\u00e1ria deve ser coletado com uma pipeta finamente graduada. Uma pequena quantidade de camada de eritr\u00f3citos n\u00e3o afeta o exame final. Algumas gotas de camada de leuc\u00f3citos s\u00e3o ent\u00e3o estendidas em l\u00e2minas microsc\u00f3picas, da mesma maneira que o sangue total, e s\u00e3o coradas pelo procedimento de Pappenheim ou por outros m\u00e9todos citoqu\u00edmicos.<\/p>\n
Indica\u00e7\u00e3o para uso de uma extens\u00e3o de camada leucocit\u00e1ria
\n1. Aumento do n\u00famero de c\u00e9lulas na leucopenia.
\n2. Exame para c\u00e9lulas anormais na leucopenia.
\n3. Rea\u00e7\u00f5es citoqu\u00edmicas na leucopenia.
\n4. Remiss\u00e3o e reca\u00edda de leucemias agudas.
\n5. Procure por cromatina sexual.<\/p>\n
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